SunBio Trans-EZ 常见细胞系转染试剂,SunBio Trans-EZ 常见细胞系转染试剂产品

SunBio Trans-EZ 常见细胞系转染试剂

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公司名称：上海生博医学生物工程科技有限公司
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产品规格： 包装说明： 1ml/支
产品数量： 现货供应中 价格说明：

详细说明

SunBio Trans-EZ 常见细胞系转染试剂

　　SunBio Trans-EZ产品适用于绝大多数常见细胞系（株）的基因转染，在最佳实验条件下，转染后细胞的存活率高达90%以上，转染效率高于其他类型的转染试剂。特点：1.转染效率高； 2.细胞毒性低；3.生物稳定性高；4.适用范围广泛；5.不受有无血清及抗生素的影响；6. 操作简单，无需更换培养基。
　　使用SunBio Trans-EZ常见细胞系转染试剂，可以采用常规转染流程，快速转染流程和优化转染流程三种方法进行实验。下述步骤是以24孔板每孔质粒转染为例，说明转染步骤及所需注意事项，在其他规格的培养皿上操作时，按底面积大小等比扩大或缩小转染体系，也可以根据实验设计计算出整个实验所需的转染体系，同时进行转染操作。一般可以在30分钟内完成全部转染实验。
　　常规转染流程（适用于绝大多数细胞的转染，简单、省时）
　　1. 转染前一天，将细胞接种到24孔板中，每个孔中加入1.5-2×105个细胞。控制细胞转染时的密度为60-80%。转染流程如图一所示。
　　2. 取1.5 ml Ep管一支，分别加入1 μg待转染质粒和1 μl Trans-EZ溶液，用Opti-MEM培养基补齐到60 μl，轻轻混匀。
　　3. 在室温放置20分钟，使DNA和Trans-EZ充分结合形成稳定的转染复合体。
　　4. 取出细胞培养板，将步骤3得到的DNA-Trans-EZ复合体加入到细胞器皿中，做好标记。放回培养箱。
　　5. 转染24-48小时后，观察质粒荧光转染效果，或者检测Luciferase酶活性，或者收取总蛋白做WesternBlot/RT-PCR等检测。

快速转染流程（很适合下班前转染，第二天上班前看结果）
　　1. 转染当天，预热细胞传代用培养基和D-Hanks溶液，准备在转染期间进行传代并接种细胞。
　　2. 取1.5 ml Ep管一支，分别加入1 μg待转染质粒和1 μl Trans-EZ溶液，用Opti-MEM培养基补齐到60 μl，轻轻混匀。
　　3. 在室温放置20分钟，使DNA和Trans-EZ充分结合形成稳定的转染复合体。
　　4. 在步骤3等待期间，将细胞消化并计数1.5-2×105个细胞到1.5 ml Ep管中，将步骤3得到的DNA-Trans-EZ复合体加入到细胞中，轻轻混匀。转染流程如图二所示。
　　5. 取出细胞培养板，将步骤4得到的DNA-Trans-EZ-细胞混合培养液加入到培养板中，做好标记。放回培养箱。
　　6. 转染24-48小时后，观察质粒荧光转染效果，或者检测Luciferase酶活性，或者收取总蛋白做WesternBlot/RT-PCR等检测。

　　优化转染流程（适用于某些对转染试剂毒性敏感度较高的细胞以及要求高质量的转染）
　　1. 转染前一天，将细胞接种到24孔板中，每个孔中加入1.5-2×105个细胞。控制细胞转染时的密度为60-80%。
　　2. 转染前一小时取出细胞板，去除原有细胞培养基，加入400 μl的Opti-MEM培养基，将细胞送回培养箱。
　　3. 取1.5 ml Ep管两支，其中一支加入1 μg待转染质粒，用Opti-MEM培养基补齐到30 μl。另一支中加入1 μl Trans-EZ溶液和29 μl Opti-MEM培养基，用移液器轻轻混匀。将Trans-EZ稀释液滴加到质粒管中，边加边轻轻弹匀。转染流程如图三所示。
　　4. 在室温放置20分钟，使DNA和Trans-EZ充分结合形成转染复合体。
　　5. 取出细胞培养板，将步骤4得到的DNA-Trans-EZ复合体加入到细胞培养器皿中，做好标记。放回培养箱。
　　6. 4-6小时后，除去细胞上清。更换为500 μl的正常完全培养基。
　　7. 转染24-48小时后，观察质粒荧光转染效果，或者检测Luciferase酶活性，或者收取总蛋白做WesternBlot/RT-PCR等检测。

转染条件优化：
　　1. 对不同物种和来源的细胞，所需的转染条件会有所不同。主要需要优化的条件为转染用质粒量，转染试剂量和培养基的体积等。以24孔板转染条件优化为例：
在转染时，可以设置质粒浓度的梯度，如0.6，0.8，1.0，1.5，2.0 μg/孔，并重复一次。
　　2. 保持转染试剂的浓度不变。操作时在同一管中配制六个孔转染所需Trans-EZ量，分别加入到不同的质粒管中。
　　3. 质粒最佳量确定后，可继续优化其他的参数。固定最佳质粒量，调整转染试剂量和质粒量的比例（V/m）在0.5倍和2倍之间变动，以确定最佳的转染试剂量。

质粒抽提：
　　质粒的抽提质量对转染的效果有很大的影响，质量不合格的质粒会导致转染效率低或重复性差。推荐使用Qiagen的大抽试剂盒(#12163)和Promega的小抽试剂盒(#A1330)进行抽提。
产品规格： 5 mg/ml

产品包装： 1 ml/支、0.5 ml/支

试剂保存： 4℃保存，请勿冷冻

例举部分GFP质粒转染细胞的照片，如208F,293,A549,B16F0,B16F10,C6, CaCo2,CHO-K1,COS-7,CT26WT,CV1,DAOY,DU145,HeLa,
HepG2,HT-1080,HUV-EC,LnCap,MCF-7,MDCK,MDA-MB-231,MS1,NCIH460,PC-3,T24， Ptk2,RPMI- 1846,SKOV-3,SVEC,U2OS,WEHI,
EU09 等细胞系。
详细图片请参考SunBio网站:www.sbo-bio.com.cn

其它信息

产品规格：		包装说明：	1ml/支
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